Immunhistochemische Färbung von Mausantikörpern auf Mausgewebe

Der indirekte Nachweis von Maus-Primärantikörpern auf Mausgeweben wird oft durch hohe Hintergrundfärbung erschwert. Das Hauptproblem ist, dass der Anti-Maus Sekundärantikörper bei indirekten Nachweismethoden nicht zwischen endogenen Maus-Immunglobulinen im Probengewebe und dem Maus-Primärantikörper zu unterscheiden vermag.

Endogene Immunglobuline sind hauptsächlich in löslicher Form im interzellulären Raum verteilt und verursachen insbesondere Probleme beim Nachweis von Antigenen, die nahe der Zelloberfläche oder in der extrazellulären Matrix lokalisiert sind.

Darüber hinaus finden sich gewebeeigene Immunglobuline auf der Zelloberfläche von Lymphozyten. Die Höhe des Hintergrunds hängt vom Gewebetyp ab und variiert von Probe zu Probe. Das Problem tritt oft in Geweben aus Muskel, Haut und Niere auf.

Endogene Immunglobuline sind nicht die einzige Ursache für erhöhten Hintergrund bei Maus-auf-Maus Färbungen.

So können u. a. auch endogene Peroxidase-Aktivität im Probengewebe oder Fc-Rezeptoren einen Einfluss haben.Peroxidase-Aktivität kann durch einen Blockierungsschritt vor der Blockierung mit Normalserum oder nach der Primärantikörperinkubation inhibiert werden.

Die Bindung des Sekundärantikörpers an Fc-Rezeptoren von Zellen und Geweben lässt sich einerseits durch eine geeignete Blockierung mit Normalserum oder speziellen Fc-Rezeptor-Blockierungslösungen verhindern. Setzt man Fab(2)-Fragmente als Sekundärantikörper ein, schließt man ein Binden an Fc-Rezeporen komplett aus.

Blockierung endogener Immunglobuline mit Fab-Fragmenten

Eine besonders effiziente Methode, die Hintergrundfärbung endogener Immunglobuline bei indirekten Nachweismethoden zu verhindern, ist die Vorinkubation des Probengewebes mit Fab-Fragmenten unkonjugierter anti-Maus Antikörper. Diese Methode kann ohne weiteres auch auf den indirekten Nachweis (Immunhistochemie, Immunfluoreszenz, Zytometrie) von Primärantikörpern anderer Spezies auf homologen Geweben und Zellen übertragen werden.

Beispielprotokoll zum Blockieren von endogenen Immunglobulinen mit Fab-Fragmentenauf Mausgewebe.