Neu: Direkter Nachweis von 6His getaggten Proteinen direkt auf der Membran mit HisDirect

Zeitsparender, sensitiver Nachweis ohne zusätzliches Detektionsreagenz (ECL)

Der anti-His-Tag Antikörper Klon 13/45/31-2 (monoklonal Maus Isotyp IgG1) wurde für den Nachweis von His-Epitop-Tags (Hexa Histidine, His6) in Zellen und komplexen Zelllysaten entwickelt und detektiert N-/C-terminale sowie interne His-Tags mit der ungewöhnlich hohen Affinität.

Mit den neuen HisDirect 60nm Gold Konjugaten an anti-His–tag Antikörper können Sie 6His-markierte Proteine direkt auf der Membran nachweisen. Das Verfahren eignet sich sowohl für Western Blot Nitrocellulose und PVDF Membranen und kann auch für Kolonie und Plattentests von Bakterien eingesetzt werden.

Es reduziert die Schritte Antikörperbindung, Waschen und Detektieren auf einen einzigen Schritt, der in der Regel binnen 10 bis 60 Minuten abgeschlossen ist. Es wird kein sekundärer Antikörper benötigt und auch der Einsatz von zusätzlichen teuren Detektionsreagenzien, wie ECL entfällt.

Vergleich herkömmlicher Detektionsmethoden und His-Direct unter Verwendung von Lysaten zweier High Five® Insekten Zellkultur Expressionsansätze. Der Pfeil markiert das Zielprotein. Links: Coomassie Färbung (3 h); Mitte: HRP-anti- Penta-His Antikörper mit ECL Reagenz (4 h); Rechts: His Direct pMolRange (20 Minuten)

HisDirect gibt es als ready-to-use Reagenz oder als praktische Pads:

Bestellnummer	Menge	Beschreibung
HisDirect-PA-010	10 Pads	HisDirect His-Tag WB Staining Pads (10x) pmol/fmol-Range (RUO)
HisDirect-PA-030	30 Pads	HisDirect His-Tag WB Staining Pads (30x) pmol/fmol-Range (RUO)
HisDirect-LP-010	10x10ml	HisDirect His-Tag WB Staining Solution pmol-Range ready-to-use (RUO)
HisDirect-LF-010	10x10ml	HisDirect His-Tag WB Staining Solution fmol-Range ready-to-use (RUO

Quantifizierung von DotBlots mit HisDirect:

Dot-Blot zur quantitativen Bestimmung der Proteinmenge eines His6-markierten 11 kDa Proteins. Der Rahmen markiert den linearen Nachweisbereich. Links: Auf einem Nitrocellulosestreifen wurden je 0,5 µL einer Proteinverdünnungsreihe für 90 min in 10 mLHisDirect pmolRange Fertigreagenz inkubiert, anschließend getrocknet und fotografiert und das Foto in Graustufen umgewandelt; Mitte: aufgetragene Proteinmenge; Rechts: Korrelation zwischen Signalintensität und Proteinmenge zur Quantifizierung mit Hilfe der Proteinverdünnungsreihe Oben: Im Quantifizierungsprogramm ermittelte Signalintensität aus dem Graustufenbild in Bezug zur aufgetragenen Proteinmenge. Innenliegend: Der lineare Bereich liegt zwischen einer Proteinmenge von 6,35 pmol und 50 pmol bzw. 69 ng und 0,55 µg.

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